湖北鑫希望药材种植中天麻蜜环菌与萌发菌母种的生产技术又将是怎样的奇迹呢
在人工栽培天麻的有性繁殖过程中,萌发菌和蜜环菌这两种共生菌的协同作用至关重要。通过不断的实践与探索,我成功地研制出了适合两种共生菌生长的培养基及相应生产技术。以下是具体操作步骤:
培养基配制
1.1 将马铃薯去皮切片后,与硬杂木屑、麦麸、玉米面各50g混合,加入自来水或天然水1300mL,用双重锅煮沸30分钟后过滤取液,补充至1000mL,加葡萄糖20g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g和蛋白胨0.5%以及10mLVB1溶解并摇均。将其装入500mL三角瓶或罐头瓶,每个约150mL,也可装于试管内,每个为容积的四分之一。在三角瓶和试管口塞棉花,罐头瓶用2层牛皮纸或4层报纸上盖塑料布封口,再用皮筋扎紧。
1.2 制作固体斜面培养基时,将"1.1"步骤中的滤液加琼脂18g加热溶化后补充至1000mL,并加入葡萄糖20g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g和蛋白胨5g以及10mgVB1全部溶解并摇均,然后将其分装于试管内,以容积四分之一量装入,并用棉花塞口。
1.3 制作木屑培养基时,将硬杂木屑50%(粉碎成小颗粒)、玉米芯25%(粉碎成小颗粒)、麦麸15%和玉米面10%混合,并外加葡萄糖0.5%,蔗糖0.5%,石膏石灰各石膏含量为百分之十九点五,以及磷酸二氢钾含量为百分之零点二,小苏打含量为百分之零点一、二%VB₁拌匀,使其含水率70%,然后充填于试管中,每个约半杯高度压实以便保存。
灭菌
使用手提式高压灭菌锅或者民用高压锅进行灭菌。
对于液体和固体斜面的培养基,在蒸汽压力达到14千克/平方厘米时保持30分钟左右,待温度降至50℃以上出锅;接种前让温度降到25℃以下。
对于木屑培养基,在蒸汽压力达到14千克/平方厘米时保持45~60分钟自然降温后出锅直接放入接种箱。
3 接种
在无菌条件下严格按照无菌操作要求进行:
对于液体培养基,从母种试管挑取一块大小略大於花生仁的小块母种放入三角瓶中;对于接種試管內部時,可選擇更小一些。
对於斜面培養基,当表面出现凝结水时接種蜜環霉孢子每支試管上應該有一到兩塊母種;對於接種萌發霉孢子的時候,要等到表面無凝结水再進行,並且每支試管上應該是一到兩塊母種。
對於木屑培養基地後不能存儲需即刻進行接種。在施苗過程中,用撈苗鉿適度推壓使其與土質緊密聯繫並立放置以利植株生長。此時應避免任何搖動動作以免影響植株健康。
4 培養
將已經被施苗的植物放在恒溫箱或專業育苗室裡,在22℃~24℃環境下進行恒溫控制直至它們達到準備好使用為止:
液體類型需要從第二天開始運行振盪器來提供定期運動,這樣可以促進根系發展。如果是使用單個試驗品,那麼需要在每日持續6~8次的手動搖晃。如果是在裝滿了大量材料的小容器,那麼在完成後就要讓它平躺7天左右即可停止所有維護任務。當物質變得清澈透明並呈淡茶色或土色時,它們已經足夠純淨,可以開始用于實際应用。但如果遇見浑浊现象或者其他不正常情况则必须丟弃,因为這可能是由于污染导致而不能继续使用。
斜面的類型則需要平放在一個水平位置48小时後才會看見微生物開始發芽並逐漸向周圍延伸。一旦這些線狀細胞穿越了整個層疙瘩,就可以將他們移除并准备用于实际应用。此类物质储存在冰箱冷藏环境下,可以保存40天以上,如果采用的是萌发霉素的话,则能维持60天以上时间间隔不会失效。
木材类型则应该竖立存放,以防止细小部分震动造成影响,一般会持续15~20天。当这些线状细胞穿越了整个层疙瘩,即可开始用于实际应用。此类物质也可以储存在冰箱冷藏环境下,但由于它们通常经过较长时间储存,因此为了预防从实验室感染其他微生物,有时候建议破坏底部的一部分供新实验室使用。这是一个额外安全措施确保没有污染发生的情况下能继续有效利用这些原材料资源。