在中草药6000种图解中天麻蜜环菌与萌发菌母种的生产技术又有哪些精妙之处呢
在中草药6000种图解的海洋中,天麻的人工栽培之路需要两种共生菌——萌发菌和蜜环菌。在实践的航船上,我发现了一条通往两者共存繁殖基因的道路。以下是这段旅程中的关键步骤:
培养基制备
1.1 首先,我们准备一份液体培养基:取100克马铃薯去皮切片,50克硬杂木屑、麦麸和玉米面,在1300毫升自来水或天然水中煮沸30分钟后过滤。取出滤液补充至1000毫升,再加入葡萄糖20克、磷酸二氢钾2克、硫酸镁1克及蛋白胨10毫升VB1溶液,然后摇匀并分装于500毫升三角瓶或罐头瓶内,每个容量约150毫升。
1.2 接着,我们制作固体斜面培养基,将“1.1”所述操作程序中的滤液与琼脂18克混合加热溶化至1000毫升,并加入葡萄糖20克、磷酸二氢钾2克、硫酸镁1克及蛋白胨5g以及10mg VB-复合维生素,均匀搅拌后分装于试管内,每个填充至其容积的四分之一,用棉花塞口。
1.3 最后,我们制备木屑培养基,将50%硬杂木屑25%玉米芯(粉碎成小颗粒)15%麦麸10%混合外加葡萄糖0.5%,蔗糖0.5%,石膏%, 石灰%, 磷酸二氢钾%, 硫酸镁% 及2%VB-复合维生素。一旦所有可溶性辅料均被添加到原料中并拌入,使其含水量为70%,然后装入试管并适当压实,每个试管填充至其容积的一半,用棉花塞口。
2 灭菌
使用手提式高压灭菌锅或民用高压锅进行灭菌。
对于液体和斜面固体培养基,在蒸汽压力达到14kPa时保持30分钟,待温度降至50~70℃时出锅;接种前待温度降低到25℃以下再接种。
对于木屑培养基,在蒸汽压力达到14kPa时保持45~60分钟自然降温后出锅直接放入接种箱。
注意:在使用灭菌锅之前应确保内部无冷空气排尽,此后才开始增加压力以防止棉塞被冲走。
3 接种
必须在无菌条件下严格按照无菌操作要求进行。
- 对于液体培养基,从母株试管挑选花生米大小的母株块(带有明显毛发)插入三角瓶内;对于其他类型,可选择稍小一些的样本。
- 对于斜面培養基,当表层凝结水形成时施予蜜环菌,以促进它的萌发;每支试管上方施予一次母株块,一次可以多次施予,但不宜过多。此外,当表面的凝结水消失时再施予萌发霉变根部各自分开施予一次,不同部分也可同时进行,但需根据实际情况调整数量,以免造成污染影响效率。
4 培育
接種後立即放置於恒溫箱或生物安全柜內,並維持22-24°C恒溫進行營養循環,有助於提高產物質量並增強抗病能力。