山西适合种植什么中药材天麻蜜环菌萌发菌母种生产技术
在人工栽培天麻的有性繁殖过程中,需要萌发菌和蜜环菌这两种共生菌的协同作用。经过实践探索,我成功研发出适合两种共生菌共同生长的培养基及生产技术。以下是具体操作步骤:
培养基配制
1.1 在双重锅中煮沸1000mL水,加入100g马铃薯(去皮、切片),50g硬杂木屑、玉米面和麦麸各50g。在煮沸后过滤,用滤液补至1000mL,加20g葡萄糖、2g磷酸二氢钾、1g硫酸镁以及蛋白胨10mg和VB1 10mL。摇均后分装于500mL三角瓶或罐头瓶内,每瓶装150mL左右,也可装入试管内,填充量为试管容积的四分之一。
1.2 制作固体斜面培养基时,将上述滤液加热溶化并补至1000mL,然后加入18g琼脂,再次加热溶化并补水至1000mL。最后加入20g葡萄糖、2g磷酸二氢钾、1g硫酸镁、5%蛋白胨以及VB11mg,并搅拌均匀,分装于试管内,每个试管填充量为其容积的一半。
1.3 木屑培养基由50%硬杂木屑25%玉米芯粉碎物15%麦麸10%,外加葡萄糖0.5%,蔗糖0.5%,石膏15%,石灰7.5%,磷酸二氢钾4%, 硫酸镁2%, VB12%. 将原料与干料混合,并将所有可溶解辅料溶于水中倒入原料中,使其含水70%, 然后放入试管并压实以便接种。
灭菌
使用手提式高压灭菌锅或民用高压锅进行灭菌。
对于液体和斜面固体培养基,在蒸汽压力达到14kg/cm²时保持30分钟,以确保内部温度降到50-70℃才出锅。此后,直接放入接种箱待温度降低至25℃以下再接种;对于斜面固体培养基,在凝结后的状态倾斜成斜面的形状(约占整个试管长度的三分之五)待自然凝固移入接种箱。
对于木屑培养基,在蒸汽压力达到14kg/cm²时保持45-60分钟自然降温后出锅直接放入接種箱。
3 接種
在无菌条件下严格按照无菌操作要求进行:
- 液体培養基:从母種試管內挑取花生米大小的少許母種(帶有細胞壁覆蓋且已發育為感染性微生物)的子孵進行轉移進三角瓶中的載體內。
- 斜面及木屑培養基:蜜環霉需在凝結後即時進行引種;每支試管上應該有約一到三塊母種;而發芽霉則在無凝結前進行引種,每支試管應該有約一到兩塊母種。
4 培養
將所需數量的小型塑料袋或紙袋包裹好,並使用無痕標籤標記日期等信息後存放在冰箱冷藏室之類的地方保存,以維持適當溫度並防止污染。一旦開始產生的新植株可以被採摘來製作新的植物品質控制標準樣本,這樣可以確保產品質量不會因為時間長久而受到影響。