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在中国药材市场交易网上我们是否已经掌握了天麻蜜环菌萌发菌母种生产技术的关键

在人工栽培天麻的有性繁殖过程中,需要萌发菌和蜜环菌这两种共生菌的协同作用。经过实践探索,我成功研制了适合两种共生菌生长的培养基及生产技术。以下是具体操作步骤:

培养基配制

1.1 在双重锅中煮沸1000mL水,加入100g马铃薯(去皮、切片),50g硬杂木屑、麦麸和玉米面各50g。在煮沸后过滤,用滤液补至1000mL,加20g葡萄糖、2g磷酸二氢钾、1g硫酸镁以及蛋白胨10mg和VB1 10mL。将所有物质溶解并摇匀,每份装150mL左右,并可装入试管内,装量为试管容积的四分之一。三角瓶或罐头瓶口用棉花塞紧。

1.2 制作固体斜面培养基时,将上述步骤中的滤液加热至溶化琼脂18g,然后补水至1000mL,再加入20g葡萄糖、2g磷酸二氢钾、1g硫酸镁5mg蛋白胨和VB110mg。在热状态下均匀搅拌后,将其分装于试管内,每个试管以其容积之一四分之一为标准,并用棉花塞住口。

1.3 木屑培养基则由50%硬杂木屑25%玉米芯粉碎成小颗粒状15%麦麸10%玉米面组成,同时加入葡萄糖0.5%,蔗糖0.5%,石膏%, 石灰%, 磷酸二氢钾%, 硫酸镁, 和VB12%. 将所有干料与原料混合,再将可溶性的辅料放入水中溶解后拌入原料,使其含水率70%,然后充分拌匀并装入试管,以容积的一半为标准压实。最后用棉花塞紧。

灭菌

使用手提式高压灭菌锅或民用高压锅进行灭菌。

对于液体培养基和斜面固体培养基,在蒸汽压力达到14kPa时保持30分钟待温度降低到50-70℃后出锅;对于液体状态的斜面固体培养基需倾斜成一定角度(占试管长度三五之比)待凝固移至接种箱;对于木屑培养基在蒸汽压力达到14kPa时保持45-60分钟自然降温后出锅直接放入接种箱。

接种

在无菌条件下严格按照无菌操作要求进行。

对于液体培养基地取母种约花生米大小到三角瓶中,对于接種試管則可以取更小一些;对於斜面的蜜环菌应在凝结水形成前接種,而对於萌发菌应等待表面无凝结水再行接種,每支試管上最多為兩個母種塊。

培養

放置恒温箱或实验室22-24℃环境下恒温营造。

液态孵育后的第二天开始启动摇床振荡,其余时间每天摇动六七次直至第7天结束使用,如果是单独使用試管則應該平放並且每日轉動6~8次。一旦浓稠或出现泡沫即判斷污染需丟弃。

斜面的孵育48小时後觀察是否發芽延伸當十幾天後贯穿整个藻类時即可用于生产,可以保存40天以上;

木質孵育十五到二十天後,一旦贯穿整根樹枝就可以采收並保存六個月不變

注意:滅真過程要先倒進足夠冷開水使內部空氣排除再壓鈕調小火候維持壓力,並非急速降壓以防止棉紙被吹走造成污染。此外滅真完成後避免快速降壓以防掉落棉紙而引起污染问题。