难道我们不知道天麻蜜环菌萌发菌母种生产技术的关键在于它是一种比较容易种植的药材吗
在人工栽培天麻的有性繁殖过程中,需要萌发菌和蜜环菌这两种共生菌的协同作用。经过实践探索,我成功研制了适合两种共生菌生长的培养基及生产技术。以下是具体操作步骤:
培养基配制
1.1 在双重锅中煮沸100g马铃薯(去芽眼、皮)、50g硬杂木屑、50g麦麸、玉米面,并加入1300mL自来水或天然水。在煮沸30分钟后,用双层纱布过滤取出滤液,补充至1000mL,加20g葡萄糖、2g磷酸二氢钾、1g硫酸镁以及蛋白胨0.5%和10mLVB1溶解摇均后,分装于500mL三角瓶或罐头瓶,每瓶装150mL左右,也可装入试管内,每个试管装量为容积的四分之一。三角瓶和试管用棉花塞口,罐头瓶上盖一层塑料布封口后,用皮筋扎紧。
1.2 固体斜面培养基按照“1.1”操作程序制作滤液,然后在滤液中加入18g琼脂并加热溶化,再补充至1000mL,加20g葡萄糖、2g磷酸二氢钾、1g硫酸镁以及5mgVB1全部溶解摇均后,将其分装于试管内,每个试管装量为容积的一分之四,然后用棉花塞口。
灭菌
使用手提式高压灭菌锅或民用高压锅进行灭菌。
2.1 液体和固态斜面培养基在蒸汽压力达到14kPa时保持30分钟待温度降至50-70℃才出锅;液体培养基直接放入接种箱;固态斜面培养基需先凝固成斜面的形状再移入接种箱。
接种
在无菌条件下严格按照无菌操作要求进行:
对于液体培养基,只需从母种试管挑取带有菌丝的小块母种(约花生米大小)到三角瓶中。
对于斜面培养基,在凝结水出现时接種蜜环菌,一般每支试管添加一到三个小块母种;对于萌发菌,当表面没有凝结水时再接種,一般每支添加一到两个小块母种。
木屑培养基地立即滅活之后使用,不得存储。此时要将木屑与潜在子材料紧密结合,使其与文化介质紧密相连,以利於子材料発芽長大。
培養
接種後,要將試劑置於恒温箱或者溫室內,在22-24℃环境下進行恒温保存:
液體種類從第二天開始進行振動過程;如果是試劍裝置,那麼應該以倾侧方式放置,並且每日至少轉動六次至八次。一周後,即七天左右,可停止這個階段。如果發現浓度增加並且呈现污染跡象,如混浊狀態等,這些都代表了異物污染,因此應該丟棄這樣的試劍。
斜面的生物體雖然需要平放,但48小时後就可以看見細絲開始增長並向外延伸。当细丝穿透整个粉末片的时候,即可用于生产。这类生物体可以保存40天以上,如果放在冰箱里保存則更长一些時間。
木屑種類需要垂直排列避免搖晃。在15-20天內,這兩類細絲會貫穿整個木屑當中的所有部位時即可用于生产。而且,由於經過冰箱冷藏儲存6個月仍能保持品質,所以為了防止交叉感染,可以從底部破開一個孔來取出植物性碎屑植株供新鲜使用。