药材种植合作公司是否已掌握天麻蜜环菌萌发菌母种生产技术的精髓
在人工栽培天麻的有性繁殖过程中,需要萌发菌和蜜环菌这两种共生菌的协同作用。经过实践探索,我成功研发出适合两种共生菌共同生长的培养基及生产技术。以下是具体操作步骤:
培养基配制
1.1 在双重锅中煮沸100g马铃薯(去芽眼、皮)、50g硬杂木屑、50g麦麸、玉米面,并加入1300mL自来水或天然水。在煮沸30分钟后,用双层纱布过滤取出液体,补充至1000mL,然后加入20g葡萄糖、2g磷酸二氢钾、1g硫酸镁以及蛋白胨0.5%和10mLVB1溶液。将所有物质均匀混合后,将其分装于500mL三角瓶或罐头瓶内,每个容量约150mL,可也装入试管内,每个装满试管容积的四分之一。三角瓶和试管用棉花塞口,而罐头瓶则用2层牛皮纸或4层报纸上盖一层塑料布封口并扎紧。
1.2 制作固体斜面培养基时,将“1.1”步骤中的滤液加热至琼脂完全溶解,再补充至1000mL,然后加入20g葡萄糖、2g磷酸二氢钾、1g硫酸镁以及蛋白胨5%和10mgVB1。将所有物质均匀混合后,将其分装于试管内,每个容量为试管的一半,待凝固后移入接种箱。
1.3 制作木屑培养基时,将硬杂木屑50%,玉米芯25%,麦麸15%,玉米面10%拌匀再外加葡萄糖0.5%,蔗糖0.5%,石膏%,石灰%,磷酸二氢钾%,硫酸镁%及2%VB%. 将可溶解辅料与干料拌均,以含水量70%收集到试管中,并压实以适当填充每个试管容积的一半,然后用棉花塞口。
2 灭菌
使用手提式高压灭菌锅进行灭菌。
对于液体和斜面固体培养基,在蒸汽压力达到14kPa时保持30分钟直至温度降低到50-70℃才出锅。
液态培养基直接放入接种箱;而斜面固体需在未冷却前倾成斜形并让它自然凝结,然后移入接种箱。
木屑培养基在蒸汽压力达到14kPa时保持45-60分钟自然降温后即可从锅中取出放入接種箱。
3 接种
无论何种类型都必须是在无菌条件下严格按照无菌操作要求进行。
- 对于液态细胞,只需从母株試管挑取大小为花生米块数的母株(带有微小数量细丝)置入三角瓶;对于其他类型可以减少此数量。
- 对于斜面的细胞,蜜环菌应趁着凝结水形成的时候进行植株;对萌发细胞,则在没有凝结水的情况下进行植株。在每根試管上植造一到三个块母種(对于蜜环細胞)或者两个块(对于萌發細胞)。
- 对於木質材料,一旦滅絕後不能保存,要立即進行植株。如果使用接種鉤則應該適度推壓,使之與土壤緊密聯繫以促進植物成長。此時必須立即放置並不應該翻動以免影響幼苗健康。
4 培養
接種後要將之立即放進恒溫摜室內,在22-24°C溫度條件下進行恒溫育苗,並且開始定期搖晃,以刺激細胞增長。一旦見到細胞活躍地向周圍擴散,即可停止育苗過程。但如果觀察到混浊狀態或大量泡沫,這通常意味著污染了,因此應丟棄並重新開始過程。此外,如果所产生的是清澈透明淡茶色或者土黄色的液體,那麼這樣就已經完成了生产阶段,可以开始使用。如果观察到了任何异常现象,就应该抛弃该批次并重新开始整个过程。