农村常见中草药300种中的天麻蜜环菌与萌发菌母种生产技术你知道吗
在人工栽培天麻的有性繁殖过程中,需要萌发菌和蜜环菌这两种共生菌的协同作用。经过实践探索,我成功研发出适合这两种共生菌生长的培养基及生产技术。以下是具体操作步骤:
培养基配制
1.1 在双重锅中煮沸1000mL水,加入100g马铃薯(去皮、切片),50g硬杂木屑、玉米面和麦麸各50g。在煮沸后过滤,用滤液补至1000mL,加20g葡萄糖、2g磷酸二氢钾、1g硫酸镁以及蛋白胨10mg和VB1 10mL。摇均后分装于三角瓶或罐头瓶,每个容量约150mL,也可装入试管,占用量为试管容积的四分之一。使用棉花塞口。
1.2 制作固体斜面培养基时,将上述液体处理后的滤液加热溶化,然后补至1000mL,再加入18g琼脂,并加热溶解并补水至1000mL。在滤液中加入20g葡萄糖、2g磷酸二氢钾、1g硫酸镁、5%蛋白胨以及10mg VB1,全部溶解后分装于试管内,以试管容积四分之一为标准,用棉花塞口。
1.3 木屑培养基由硬杂木屑50%(粉碎成小颗粒)、玉米芯25%,麦麸15%,玉米面10%组成,以及外加的葡萄糖0.5%、蔗糖0.5%、石膏石灰各含量为%,磷酸二氢钾含量为%, 硫酸镁含量为%,VB含量为%.将原料与干燥物拌匀,然后将所有可溶性的辅料混合并倒入原料中,使其达到70%湿度状态,充分拌均后装入试管并压实以适当厚度。每个试管填充到半满即可,用棉花塞口。
灭菌
使用手提式高压灭菌锅或民用高压锅进行灭菌。
对于液体和斜面固体培养基,在蒸汽压力达到14千克/平方厘米时保持30分钟,即使温度降至50-70℃才出锅。一旦出锅直接放入接种箱待温度降低到25°C以下再接种;而对于斜面固体培养基需在蒸汽下形成斜面的状态(长度约占整个试管长度的3/5)待其自然凝固后移入接种箱。
木屑培养基则在蒸汽压力达到14千克/平方厘米时保持45-60分钟自然降温出锅直接放入接种箱。
接種
必须在无菌条件下严格按照无菌操作要求进行。
4 培養
接种完成之后,要立即将它们放置于恒温箱或者普通室内,在22~24℃恒温环境下进行定期振荡文化盘。如果使用的是封闭型塑料袋,则应确保袋子密封好,以防止空气进入影响生物群落发展。当第7天结束时,可以停止摇晃并收集成熟的大规模生产所需材料。如果发现任何污染迹象,如浊度增多或表层膜状泡沫等,则必须丢弃此次结果重新开始。此外,还可以通过检查是否有正常发酵产生茶色质来判断是否已准备就绪用于大规模生产。这通常需要几周时间,这取决于你使用哪些类型微生物。你应该注意观察这些细微变化,并根据情况调整你的方法。这一过程对保持良好的卫生条件非常重要,因为任何不洁净都会导致失败从而浪费资源和时间。