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速段中药材是怎么种植的天麻蜜环菌萌发菌母种生产技术

在人工栽培天麻的有性繁殖过程中,需要萌发菌和蜜环菌这两种共生菌的协同作用。通过生产实践,笔者成功研制了适合两种共生菌生长的培养基和相应的生产技术。

具体操作步骤如下:

培养基配制

1.1 首先,将马铃薯去芽眼、皮层切片后,与硬杂木屑、麦麸、玉米面各50g混合,用自来水或天然水1300mL煮沸30分钟后过滤。取滤液补充至1000mL,加葡萄糖20g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g及蛋白胨0.5%,10mLVB1溶解并分装于500mL三角瓶或罐头瓶内,每瓶约150mL,也可装入试管内,容量为试管容积的四分之一。然后用棉花塞口,并将三角瓶和试管密封。

1.2 制作固体斜面培养基时,将上述滤液加热溶化并补充至1000mL,再加入琼脂18g进行混合,然后以此配方制作出适用于接种萌发菌母种的一系列培养基。

1.3 木屑培养基则由硬杂木屑50%、玉米芯(粉碎成小颗粒)25%、麦麸15%及玉米面10%组成,并外加葡萄糖0.5%、蔗糖0.5%等辅料使其含水量达到70%,最后装入试管中压实,以便耐存储便于邮寄。

灭菌

利用手提式高压灭菌锅或者民用高压锅进行灭菌。在稳定保持蒸汽压力为1.4kg/平方厘米30分钟后自然降温,当温度降至50~70℃时即可出锅。对于液体培养基直接放入接种箱,而固态斜面培养基需待凝固后移入接种箱;木屑培养基则在45~60分钟内完成灭菌。

接种

在无菌条件下严格按照无菌操作要求进行。

对于液体培养基,只需从母种试管挑取一块带有孢子的大致花生米大小的母種块直接放入三角瓶中。

对于斜面的媒质,由蜜环环状根毛细胞开始快速扩散而非慢速扩展,这个特定的时间点非常关键。当媒质表面出现凝结水时,即是最佳时机开始接种,每支試管可以添加一到三个大概圆形或扁平形(直径不超过8毫米)的孢子团块;对萌发细丝,则当媒质表面没有凝结水的时候再次添加一到两个这样的孢子团块。

木屑媒質滅燒後立即進行種植,不應保存以免污染。一旦滅燒就要立刻進行種植時,要使用特殊工具轻轻推动每一个植物物件,使其与植物紧密结合,這樣能夠讓它們更好地發育長大,一旦種植完毕立即將其放置於恒温箱內進行維護與觀察

培養

接种后的所有材料应立即放在恒温箱或标准实验室环境下,在22-24摄氏度条件下进行恒温维护。在整个过程中必须保证这些环境因素始终保持稳定,以确保良好的生物反应率。

液体样本从第二天起每日摇晃一次6~8次,如果是微型试验设备,那么应该根据实际情况调整频率。但通常建议7天左右停止振荡,因为此刻已经足够产生大量有效生物产品。如果观察到任何异常如浓缩或浮动膜说明可能存在污染,因此该样本应该被废弃掉。

斜面的样本则需要水平放置,经过48小时之后就能够观察到细丝逐渐向周围扩散。当它们穿透整个媒质层(对于蜜环这种类型来说这个时间会稍长一些)之后,就可以用于最终应用。这类产品如果存放在冰箱冷藏区,可以保持40天以上质量稳定,但如果选择延长保鲜期限,最好是在零度以下保存至少40天才能确保质量不会受到影响。

木屑样品则需要竖直摆放,以防止由于震动而引起细丝破裂,从而导致效率低下。经15-20个昼夜之后,当細丝完全贯穿整根木材底部区域之际,即证明该產品已經達到了商業化準備状态。此类产品也可以在冰柜里储存几个月期间,其品質會保持不變,不过为了减少传播病毒风险,在使用前最好從試管底部打洞取出部分原材料作为新的基础開始再次插入新原料,这样的措施能夠有效減少病毒傳播風險並提高最終產品質量。