近几年种植哪些药材前景最好天麻蜜环菌萌发菌母种的生产技术解析
在人工栽培天麻的有性繁殖过程中,需要萌发菌和蜜环菌这两种共生菌的协同作用。经过实践探索,我成功研制了适合两种共生菌生长的培养基及生产技术。以下是具体操作步骤:
培养基配制
1.1 在双重锅中煮沸100g马铃薯(去芽眼、皮)、50g硬杂木屑、50g麦麸、玉米面,并加入1300mL自来水或天然水。在煮沸30分钟后,用双层纱布过滤取出液体,补充至1000mL,然后加入20g葡萄糖、2g磷酸二氢钾、1g硫酸镁以及蛋白胨0.5%和10mLVB1溶液。将所有物质均匀混合后,将其分装于500mL三角瓶或罐头瓶内,每个容量约150mL,可也装入试管内,每个装满试管容积的四分之一。三角瓶和试管用棉花塞口,而罐头瓶则用2层牛皮纸或4层报纸上盖一层塑料布封口并扎紧。
1.2 制作固体斜面培养基时,将“1.1”步骤中的滤液加热至琼脂完全溶解,再补充至1000mL,然后加入20g葡萄糖、2g磷酸二氢钾、1g硫酸镁以及蛋白胨5%和10mgVB1。将所有物质均匀混合后,将其分装于试管内,每个容量为试管的一半,待凝固后移入接种箱。
1.3 制作木屑培养基时,将硬杂木屑50%,玉米芯25%,麦麸15%,玉米面10%拌匀再外加葡萄糖0.5%,蔗糖0.5%,石膏%,石灰%,磷酸二氢钾%,硫酸镁%及2%VB%. 将可溶解辅料与干料拌均,以含水量70%收集到试管中,并压实以适当填充每个试管容积的一半,然后用棉花塞口。
2 灭菌
使用手提式高压灭菌锅进行灭菌。
对于液体和斜面固体培养基,在蒸汽压力达到14kPa时保持30分钟直至温度降低到50-70℃才出锅。
液态培养基直接放入接种箱;而斜面固体需在未冷却前倾成斜形并让它自然凝结,然后移入接种箱。
木屑培养基则需在蒸汽压力达到14kPa时保持45-60分钟自然降温后出锅直接放入接種箱。
3 接種
在无菌条件下严格按照无菌操作要求进行:
- 对于液态培養基,从母種試管內挑取大小為花生米的母種進行接種;对于試管型,则可以选择较小的部分。
- 对於斜面的育苗盤,一般是在有凝結水時進行蜜環真黴子的交植,並且每個試驗品上應該交植一到三塊母種;對於發芽真黴子則等待表面的無凝結水後再交植,一般為一到兩塊母種。
- 木屑育苗盤滅活後不能存儲,必須立即進行交植,用專門工具輕輕壓迫,使之與土質緊密連繫並固定位置,即可開始長時間保存6個月不變質,不過因為會存在感染異常細胞的風險,所以通常從底部破壞一個小孔來抽取新的土樣來進行新的育苗工作。
4 培養
交植後立即將其放在恒温箱或实验室裡,在22-24°C溫度下持續固定溫度環境調節。一旦開始摇床振荡或日常的手动摇动应从第二天开始。如果使用的是玻璃杯或者其他类似盛器件,其震动后的方向应该是倾斜状态。当湿度高的时候应确保稳定环境避免大量气泡产生,因为这样可能会导致细微生物污染。此外,如果发生任何异常情况,如浓缩、高气泡或者出现不同颜色沉淀,这些都可能意味着已被细微生物污染,因此必须丢弃该样本重新制作新样本以保证质量安全。