云南中药材种植中的天麻蜜环菌萌发菌母种生产技术又能如何
在人工栽培天麻的有性繁殖过程中,需要萌发菌和蜜环菌这两种共生菌的协同作用。经过实践探索,我成功研制了适合两种共生菌生长的培养基及生产技术。以下是具体操作步骤:
培养基配制
1.1 在双重锅中煮沸1000mL水,加入100g马铃薯(去皮、切片),50g硬杂木屑、玉米面和麦麸各50g。在煮沸后过滤,用滤液补至1000mL,加20g葡萄糖、2g磷酸二氢钾、1g硫酸镁以及蛋白胨10mg和VB1 10mL。摇均后分装于500mL三角瓶或罐头瓶内,每瓶装150mL左右,也可装入试管内,以试管容积的四分之一为限。
1.2 制作固体斜面培养基时,将上述液体混合物加热溶解,并补水至1000mL,然后加入18g琼脂,再次加热溶化并补水至含量适宜,最后将所有溶解物添加到滤液中,并摇均后分装于试管内,每个试管约充满一半。
1.3 木屑培养基由硬杂木屑50%、玉米芯25%(粉碎成小颗粒状)、麦麸15%和玉米面10%,外加葡萄糖0.5%、蔗糖0.5%、石膏1%、石灰0.5%、磷酸二氢钾0.2%及硫酸镁0.1%,以及VB120%. 将原料与干燥材料拌匀,再将所有可溶助剂混合并倒入其中,使其含水率为70%, 最终填充到每个试管的一半部分。
2 灭菌
使用手提式高压灭菌锅或民用高压锅进行灭菌。
液体和固态培养基在蒸汽压力达到14kPa时保持30分钟待温度降至50-70℃出锅;接种前需让温度降低到25℃以下。
木屑培养基在蒸汽压力达到14kPa时保持45-60分钟自然冷却后出锅。
3 接种
必须在无菌条件下严格按照无菌操作要求进行接种。
- 对于液体培养基,从母种取花生米大小的母株块放入三角瓶中。
- 对于斜面培养基,在凝结水形成时接种蜜环菌,一般每支接入一到三个母株块;对于萌发菌,在表面的凝结水消失之前再接种,每支斜面可以使用一个或两个母株块。
- 木屑培养基应立即接種,通过推动植物单元使之紧密贴合子材,以利於微生物生長後立即放置。
4 培養
已完成的实验室样本应立即放在恒温箱或者温控环境下22-24摄氏度恒温孵育。
- 液体样本从第二天开始定期搖晃,不论是机器还是手动,每日至少6-8次。当7天後發現無明顯污染跡象時,可停止孵育並將結果用于生产。如果發現浊度增大或見到了泡沫等迹象則應該棄掉樣本,因为這通常表示了污染現象。此時所獲得之產品應該呈现清澈透明状态,有时候也可能呈现淡茶色或土黄色,如果不符合這些標準,那麼它就被認為是受到污染,所以必須丟棄它。
- 斜面樣本要平放孵育48小时以觀察是否有細絲開始發展進一步向周圍擴散當十到十五天後細絲穿透整個斜面的話,即可用於商業目的。而且,這兩種微生物保存時間較長,可以放在冰箱裡保存40天以上對於蜜環霉菇而言,或更長達60天以上對於萌發霉菇而言,但仍需要注意環境衛生的問題來防止再次感染其他病原體。
- 木質樣本則需垂直地存儲,並避免因振動導致植物單元移動過多。在15~20天內孵化期間,当细丝穿越整个容器底部時,就可以將其用于生产。這些储藏好的木质样品能够保存六个月期间质量稳定,没有显著变化。如果要从这些储藏后的木质样品采取新的植株单元进行进一步使用,则应该先破坏它们以防止重新感染其他病原體從試管底部移除植株单元進行新一次試驗。但是在實際操作中,這種情況很少會發生,因為珍貴的是最初的人造農場中的初級植株單位,而不是從那裡產生的複製個體。这就是为什么我們專注於保護原始植株,而不是那些複製自它們的小型版本的地方所在。在这种情况下,我们对它们采取更加严格的手段来保护它们免受任何潜在威胁,这包括任何可能导致疾病传播给我们的措施,因为我们知道最脆弱的是最初的一个真正源头,这是一个来自自然界的人造农场,它们包含了我们希望保护尽可能多数量完美健康植物来源,因此尽管这样做看起来有点极端,但实际上这是为了确保我们得到足够数量没有疾病发生的情况下的最佳结果供市场销售。这就是为什么当你考虑购买什么样的产品的时候,你应该记住这个基本事实:如果你的目标是在安全健康方面寻求最大程度上的保障,那么选择那些已经证明自己能够提供这一点产品会比那些未经验证但价格便宜或者具有诱人的广告语产品更好。你不能仅仅因为价格便宜就忽视一个简单的事实:只有最优秀,最卫生,最安全才值得信赖,并且能提供最高质量服务。当您做决定的时候,请记住这是一项重要投资,是您的家庭成员福祉的一部分,是您未来生活质量的一个关键组成部分。如果你愿意为了自己的家人安全支付额外费用,那么请相信我,您不会错过机会——因为现在正是时候行动起来!