中国中药材交易中心官网天麻蜜环菌萌发菌母种生产技术又何其精妙
在人工栽培天麻的有性繁殖过程中,需要萌发菌和蜜环菌这两种共生菌。笔者通过生产实践,成功研制了适宜两种共生菌生长的培养基及相应的生产技术。这一技术体系具体包括以下几个步骤:
培养基配制
1.1 将马铃薯去芽眼、去皮切片,混合硬杂木屑、麦麸和玉米面,每种50g,用水1300mL煮沸30分钟后过滤取液,补至1000mL,再加入葡萄糖20g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g以及蛋白胨溶液(10%),摇匀后分装于500mL瓶中,每瓶约150mL,可也可装入试管内至容积的四分之一,并用棉花塞口。这种培养基特点是技术高效,但不宜长期保存。
1.2 制作固体斜面培养基时,将上述滤液加琼脂18g后加热溶化并补水至1000mL,再加入葡萄糖20g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g以及蛋白胨5%与VB11%混合物(10mg),摇均后分装于试管内为其容积之四分之一,然后用棉花塞口。这种培养基耐贮藏,便于邮寄。
1.3 木屑培养基由硬杂木屑50%,玉米芯25%,麦麸15%,玉米面10%组成,加上葡萄糖0.5%、蔗糖0.5%、石膏1%等干料拌均,将可溶解辅料以水稀释并拌入原料,使其含水量为70%,充分拌均后装入试管压实至半满,用棉花塞口。这种培养基便于存储。
灭菌
使用手提式或民用高压灭菌锅进行灭菌操作。在稳定压力达到14kg/平方厘米的情况下保持30分钟左右待温度降低到50-70℃出锅;接下来将液体培养基放入接种箱中,在温度降低到25℃以下时进行接种;而斜面固体则需在凝固前倾斜成斜面,待凝固后移入接种箱。
接种
在无菌条件下严格按照无菌操作要求进行:
对于液体培养基地质取母种块(带有微小数量的共生细菌)放置其中,或使用更少量的小块母种;
对于斜面的蜜环或者萌发菌需在凝结水形成时进行接種,一般每支试管上添加一到三块母種,对於萌發蟲則是在表面無凝结水時進行,一般每支試管上添加一到兩块;
木屑根據滅傻後立即進行接種,以免影響細胞活性。
培養
接種後將材料放置於恒温箱或溫室內,在22-24°C溫度下進行恒温保鲜。
液體類型:從第二天開始對其進行搖動調整,並且持續6-8次日常搖動直至7天左右結束應該立即用于生产。如果浓度增加或出现泡沫,则说明污染发生,该批次不可用于生产。
斜面的類型:48小时內可以看見細絲開始擴散並向外延伸。当细丝穿透整个生物质文化底盘(对于蜜环需要更長時間)時,即可用于生产。此类生物质储存在冰箱中的保存期限为40天对蜜环类别和60天对其他类别,不会影响质量。
木屑类型:垂直存放在15-20天之间,当霉变开始产生新的霉丝网络覆盖整个生物质文化底盘时,即可用于生产。此类生物质储存在冰箱中的保存期限达到了六个月没有任何质量问题。在从冰库取出之前,可以通过破坏底部部分来确保不会受到污染。