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什么药材最赚钱天麻蜜环菌萌发菌母种生产技术

在人工栽培天麻的有性繁殖过程中,需要萌发菌和蜜环菌这两种共生菌的协同作用。经过实践探索,我成功研制了适合两种共生菌生长的培养基及生产技术。以下是具体操作步骤:

培养基配制

1.1 在双重锅中煮沸1000mL水,加入100g马铃薯(去芽眼、皮、切片),50g硬杂木屑、麦麸和玉米面,以及葡萄糖20g、磷酸二氢钾2g和硫酸镁1g。在煮沸30分钟后,用双层纱布过滤取出滤液,并补充至1000mL。加入蛋白胨0.5%(10mLVB1)并摇均,然后装入500mL三角瓶或罐头瓶,每个容量约150mL,也可装入试管内,以试管容积的四分之一为宜。

1.2 制作固体斜面培养基时,将“1.1”步骤中的滤液与琼脂18g加热溶化,再补充至1000mL。在滚烫状态下加入葡萄糖20g、磷酸二氢钾2g和硫酸镁1g,蛋白胨5g以及10mgVB1,然后摇均分装于试管内,每个容量为试管容积的一分之四,用棉花塞口。

1.3 木屑培养基由50%硬杂木屑、25%玉米芯粉碎颗粒、中等磨碎麦麸15%,玉米面10%,外加葡萄糖0.5%,蔗糖0.5%,石膏一份石灰半份各按比例拌匀,再将所有可溶解辅料用水溶解并拌入原料中,使其含水率为70%。将混合物压实后装入试管,一般以每个试管为一半高度填充,用棉花塞口。

2灭菌

使用手提式高压灭菌锅或者民用高压锅进行。

对于液体和斜面固体培养基,在蒸汽压力达到14kPa时保持30分钟待温度降至50℃左右出锅;接种前需待温度降低到25℃以上。

对于木屑培养基,在蒸汽压力达到14kPa时保持45~60分钟自然降温后出锅直接放入接种箱。

注意:在开始灭菌前应确保灭菌锅已充满水,并且内部空气排除后再启动;在冷却过程中不得过快以防止棉塞被冲走。

3接种

严格按照无菌操作要求进行,无论何种类型,都必须是在无尘环境下完成。

液态培育只需从母株取几块带有丝孢的母株材料,即可用于新的三角瓶或罩头瓶;对于斜面的定型品则应该在凝结形成之后进行接種,以利於蜜環霉類之發芽。而對於萌發霉類,则應選擇無凝結狀態進行種植,每支試管上應該插上一兩個母株材料片段。

木質矧材種植時,不要存儲滅活後即刻種植,並將種子與材料緊密聯繫好,以便更有效地促進生物體適應環境並成長。此後立即放置並保持溫度為22~24℃,避免干燥與光照過多因素影響生物體增長速度。

4 培養

實驗室內進行恒温調節,使得環境溫度維持在22~24℃之間,促進生物體正常增長。

液態樣本從第二天開始運行搖動器以提高營養物質傳輸效率;如果是手動方式則每日六到八次翻轉確保均勻分布。如果為試管則翻轉完畢後需要傾斜保存直至七天終止,這時候可以觀察是否達到清澈透明或淡茶色,如果不符合這些標準可能存在污染問題必須重新製作新批次產品供測試使用成熟产品应呈现清澈透明,如出现浊涩或表层膜状泡沫则表示存在杂质污染,该批次产品废弃重新制作新批次产品供测试使用

4 斜面樣本40小时後觀察是否有初期細胞活動逐漸向周圍延伸當十到十五天細胞網絡穿越整個矧材時就準備採收此类产品储存于冰箱内保存时间分别为40天及60天

4 木質样本經過15~20 天后的某點時間,当微小细丝穿透整个包裹部位时,此类产物也准备采集此类产品储存于冰箱内长达6个月不变质量