黑木耳液体菌种制作规程

工艺流程：斜面菌种→初级摇瓶种→二级摇瓶种→发酵罐深层发酵种→接种 一、摇瓶种的制作 1斜面菌种准备：马铃薯200克（去皮切块煮沸过滤取滤液），蔗糖20克，麸皮30克（煮汁过滤取滤液）二氢钾2克，硫酸镁1克，琼脂20克，VB1 10毫克，水1000毫升。25度培养7天备用。 2、初级摇瓶制作 ①配方 土豆200克 葡萄糖20克 酵母膏 2克 蛋白胨3克 磷酸二氢钾2克 硫酸镁1克 VB110毫克 水1000毫升。（配方2：玉米粉4%，蔗糖3%，麸皮2%，酵母膏0.5%，2氢钾0.25%，硫酸镁0.1%，VB1 0.01%，豆油0.05%）。 ②制作：土豆去皮切成薄块，煮沸后保持20分钟，四层纱布过滤后取滤液，补足1000毫升水，称取其他成份，与土豆液充分搅匀然后装入三角瓶。 初级摇瓶采用500ml三角瓶，装入200ml,放入玻璃球5粒（0.5cm直径）用二层纱布包裹制作棉塞，塞紧棉塞后再用二层纱布外层加报纸做罩，扎紧瓶胫，防止摇动时棉塞活动。 ③灭菌：把三角瓶放入立式高压锅，加足水紧好盖，开启放气阀，接通电源，有蒸汽冒出时关闭放气阀，待压力表达到0.05MPa时,断掉电源,打开放气阀,放冷空气至压力表回0，再关闭放气阀，接通电源，当压力表显示0.11 MPa，温度达到121℃后开时计时，保持45min。断电使其自然降至0.02 MPa时放气归0，趁热微开盖，使剩余蒸汽烘干棉塞，然后出锅降温至25℃即可接种。 ④接种：首先，封闭接种室，用开启紫外线灯30分钟，再用臭氧灭菌器灭菌60分钟或用烟雾剂每立方5克熏蒸30分钟，进行接种环境灭菌。把灭菌后的三角瓶放入超净台（或接种箱）,把斜面母种、工具、酒精灯、75%的酒精棉球瓶同时放入，母种用灭过菌的报纸遮盖，打开紫外线灯和无菌风开关，保持15min后，关闭紫外线灯进行接种。操作人员应着干净的隔离衣，带好卫生帽、口罩，手洗净，用75%酒精擦拭手、母种试管、工具，点燃酒精灯，灼烧工具及试管口20秒，在严格无菌操作程序下，把斜面菌种切割成0.5厘米小块（不带培养基），移入三角瓶中，使其浮在液面，一般接入5-6块，塞好棉塞，接完后重新封好棉塞罩，放到25℃恒温环境净置培养72小时。 ⑤初级摇瓶培养。当静置培养72小时后，液面菌种长到1厘米大，无污染，即可将三角瓶放到小型摇床上，一般能放6瓶（也可使用电磁摇床），固定好三角瓶，保持培养温度25℃，启动开关，调速至140r/min，培养96小时，当菌液颜色清亮、菌球密集，占整个培养液的80%以上，瓶口处有很浓的菇香味，可作为二级摇瓶扩大培养的种子使用。